Determinarea grupelor sanguine prin metoda Beth-Vincent cu ser antiA antiB

Hematia umana are un numar foarte mare de antigene pe suprafata sa.

Anticorpii respectivi poarta numele de aglutinine pentru faptul ca provoaca

reactii de aglutinare.

Aglutininele sunt anticorpi naturali si se gasesc in serul sanguin. De o importanta deosebita sunt aglutinogenele A si B, precum si aglutinogenul Rh.

Fata de aglutinogenele A si B, in sangele altor persoane exista anticorpi naturali = aglutininele (alfa) α (ANTI-A) si (beta) β (ANTI-B Coexistenta unui aglutinogen cu aglutinina corespunzatoare (A α , B β) la aceeasi persoana nu este compatibila cu viata, deoarece prezenta aglutinogenului si aglutininei omoloage produce aglutinarea globulelor rosii.

Studierea fenomenului de hemaglutinare a facut posibila descoperirea grupelor sanguine de baza - sistemul O.A.B. (zero, A, B)

Sistemul sanguin O.A.B. cuprinde patru grupe de sange. Grupele se noteaza dupa numele aglutinogenului, deosebindu-se astfel: grupa: 0 (zero) A, B si AB. Un alt cercetator clasifica grupele sanguine notandu-le cu cifre romane: I, II, III, IV.

Astazi, pentru a inlatura posibilitatea unei interpretari gresite a grupelor sanguine de baza, ambele clasificari au fost unificate, sistemul sanguin OAB fiind reprezentat astfel:

Dupa cum se vede, grupa 0 (I) nu are nici un aglutinogen (zero aglutinogen), celelalte au aglutinogen A sau B, sau amandoua - AB.

Determinarea grupelor sanguine se face prin doua metode:

metoda directa Beth-Vincent (aglutinine cunoscute si aglutinogen necunoscut);­

metoda inversa - Simonin (aglutinogen cunoscut si aglutinine necunoscute) .

Transfuzia de sange nu se poate efectua fara determinarea grupei sanguine.

Metoda Beth-Vincent cu ser anti-A  anti-B

Anticorpii monoclonali ANTI A si ANTI B sunt de tip IgM si produc aglutinarea directa, pe lama, la temperatura camerei, a antigenelor omoloage A, respectiv B. Reactivii au fost testati prin mai multe metode, sunt specifici, au o aviditate mult mai mare decat cele de sursa umana.

Metoda de lucru:

Se foloseste sange venos 3-4 ml.

Pe o lama cu godeuri, se picura cate o picatura de ser ANTI A respectiv ANTI B; alaturi, in dreptul fiecarei picaturi de ser, se adauga cate o picatura de eritrocite de determinat (picatura de ori mai mica decat picatura de ser); picaturile de ser se omogenizeaza cu cele de eritrocite, cu coltul unei lame sau cu bagheta de sticla; dupa 3-4 secunde, apar primele semne de aglutinare, iar reactia este completa dupa un minut.

1. Daca aglutinarea nu se produce, inseamna ca sangele cer­cetat nu are aglutinogenul. Apartine grupei 0I.

2. Daca aglutinarea se produce in serul ANTI A, inseamna ca sangele cercetat are aglutinogen A. Sangele apartine grupei AII.

3. Daca aglutinarea se produce in serul ANTI, B, inseamna ca sangele de cercetat are aglutinogen B. Sange/e apartine grupei B III.

4. Daca aglutinarea se produce in ambele seruri-test, inseamna ca sangele contine atat aglutinogen A, cat si aglutinogen B Face parte, deci, din grupa AB IV.

Important: simultan cu determinarea antigenelor A si B, prin metoda de mai sus, este obligatorie si determinarea anticorpilor, prin metoda Simonin:

Metoda de determinare a aglutininelor

Pentru metoda Simonin se folosesc hematii test care se obtin de la fiecare punct de transfuzie; valabilitatea hematiilor este de maximum 3 zile.

Avem, deci,  aglutinogen cunoscut si aglutinine necunoscute.

. Materialele necesare sunt aceleasi ca si la proba directa(seruri-test, lama cu 3 godeuri, lame de sticla curate si uscate, pipete pentru fiecare ser hemotest in parte, pipete pt.sangele de cercetat, materiale pentru recoltat sangele) dar, in loc de seruri-test, se folosesc eritrocite-test. Este nevoie, de asemenea, de ser sau plasma, deci nu este suficienta recoltarea numai prin inteparea pulpei degetului, ci trebuie sa se recolteze sange prin punctie venoasa.

Tehnica :

cu o pipeta Pasteur, pune cate o picatura din serul sau plasma de cercetat in doua godeuri;

deasupra fiecarei picaturi de ser de cercetat, aflat pe lama, se pune o picatura din hematiile test - cu aglutinogenul cunoscut, respectiv hematii - test AII si BIII;

Atentie! Si prin aceasta metoda, cantitatea de ser este de 10 ori mai mare decat cea de hematii.

- se efectueaza omogenizarea.

interpretarea rezultatelor

- Daca aglutinarea s-a produs in ambele picaturi omogenizate, inseamna ca in serul de cercetat se afla ambele aglutinine (α si β Serul de cercetat face, deci, parte din grupa 0I.

- Daca aglutinarea se produce numai in picatura de ser in care am pus eritrocite - test BIII - inseamna ca aglutinogenul B s-a intalnit cu aglutinina omoloaga β ;  Deci serul apartine grupei AII.

Daca aglutinarea se produce numai in picatura de ser in care am pus eritrocite - test A II - inseamna ca s-a intalnit cu aglutinina a, care a aglutinat hematiile-test. Serul apartine grupei B III

- Daca aglutinarea nu s-a produs in nici una din picaturile serului de cercetat inseamna ca serul nu are aglutinine, deci face parte din grupa ABIV